PCR, elettroforesi e lettura del DNA
La PCR è una reazione a catena della polimerasi che amplifica in vitro un frammento di DNA. In un termociclatore si alternano denaturazione della doppia elica, appaiamento dei primer e allungamento a opera della Taq polimerasi. Ogni ciclo raddoppia circa il numero di copie, con crescita esponenziale: .
- Elettroforesi su gel: separa i frammenti per dimensione; il DNA, carico negativamente per i gruppi fosfato, migra verso il polo positivo e i frammenti piccoli avanzano più velocemente.
- Southern blot: trasferisce il DNA su membrana e usa una sonda per evidenziare un frammento specifico per ibridazione.
- Sequenziamento di Sanger: blocca la sintesi con nucleotidi modificati fluorescenti e permette di leggere la sequenza.
Clonaggio e clonazione
Il clonaggio copia un gene o un frammento tramite vettori plasmidici; la clonazione produce copie di cellule o organismi. La clonazione riproduttiva punta a un individuo intero, come Dolly; quella terapeutica produce tessuti e usa cellule staminali. Le iPSC sono cellule adulte riprogrammate con quattro geni e diventate pluripotenti, utili per evitare problemi etici e rigetto.